因為新冠疫情的影響，為了配合疫情的防控，很多地方都需要進行核酸檢測，那么你知道核酸檢測的流程是怎樣的嗎？下面是小編整理的核酸檢測的方法原理和流程，歡迎大家閱讀分享借鑒。

更多核酸檢測相關內容推薦↓↓↓

核酸檢測是鼻子還是喉嚨

六種人不宜做核酸檢測

新冠核酸檢測是怎么測的

核酸檢測納入醫保么

核酸檢測是怎樣檢測的

眾所周知，新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)是一種烈性呼吸道傳染病，其病原體為新型冠狀病毒。若想證實已出現的感染癥狀是由本病毒所引起，最準確的方法是從患者體內分離出活病毒，并進行病毒培養。

然而，此方法并不適合大面積應用，在此次疑似病例的確診工作中，也并不適用。這是因為病毒培養所需時間較長，需要的場所條件也很高(P3級實驗室)，時效性遠遠跟不上臨床需要。

而核酸檢測作為病原學的檢測手段之一，效率很高，一般情況下幾個小時就可以知道結果。因此，在此次疫情中，臨床上取得病原學證據的主要方式并不是病毒培養，而是核酸檢測。

核酸是遺傳信息載體，是對DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)的統稱。病毒則主要由遺傳物質和蛋白質組成。而新型冠狀病毒正是一種RNA病毒，其遺傳物質是單鏈RNA。核酸檢測的原理，正是檢測在被測者的咽拭子等樣本中，是否存在病毒的RNA。如果存在，說明被病毒感染。那么，我們是否已經獲悉了病毒的RNA呢?

在疫情初期，中國疾病預防控制中心應用宏基因組學技術，在短時間內完成該病毒的鑒定，并獲取了全基因組序列。在病毒全基因組序列公布后，實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)試劑被快速研發。

隨后，核酸檢測試劑盒被應用于臨床，并為確診新冠肺炎提供病原學證據。那么，應用試劑盒進行核酸檢測，究竟是怎樣的一個過程呢?

首先，檢測人員需要在試劑的幫助下，將樣本中的核酸提取出來。再把已經分離出來的核酸加到核酸擴增試劑中，然后將其放到核酸擴增儀內，一般兩個小時內就會有結果。

事實上，在操作步驟中，擴增是很重要的一環。擴增的意義在于能讓微量的遺傳信息成指數增加。只要樣本中有核酸基因片段，就能用PCR法加以放大，從而更清晰地與病毒全基因組序列實現比對。

實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法已在臨床實驗室應用多年，檢測體系成熟，具有特異性強、靈敏度高、檢測周期短和可定量檢測的優點，而且還能對病毒感染程度和治療效果進行動態監測。

中日友好醫院呼吸與危重癥醫學科主任醫師陳欣在記者采訪中介紹道：核酸檢測十分敏感，只要在被檢者的分泌物樣本中找到一部分病毒的核酸，就可以通過RT-PCR擴增的方式，整合成序列。

"雖然不確定核酸是否來自于活病毒，但對于有呼吸道感染癥狀的患者或疑似患者來說，如果其咽拭子有這種核酸，一般認為來源于活病毒的一部分，間接證實其體內存在著病毒的繁殖和感染。" 陳欣告訴記者。

核酸檢測容易出現"假陰性"

雖然核酸檢測有靈敏度高、檢測周期短等優點，但也存在著一定的弊端。不同于從人體內直接分離出活病毒的方式，核酸檢測采用的是一種間接的方式，有可能造成假陰性。

因為試劑盒存在最低檢測限的問題，所以只有當采到的樣本中，病毒的含量達到一定程度時才能檢測出來。少數情況下，可能康復者并未康復，但由于樣本中病毒載量低，故康復者核酸檢測的結果呈陰性，也就是我們常說的"假陰性"。

因此，在《新型冠狀病毒肺炎診療標準(試行第七版)》中，出院標準之一為連續兩次痰、鼻咽拭子等呼吸道標本核酸檢測陰性(釆樣時間至少間隔24小時)。

而之所以選取呼吸道標本進行核酸檢測，是因為新冠肺炎屬于呼吸道傳染病，故而優先考慮從呼吸道的分泌物中取得標本。呼吸道又分為上呼吸道和下呼吸道，前者主要包括鼻、咽、喉;后者主要包括氣管、主支氣管及肺內各級支氣管。

相應地，現在對疑似患者檢測病毒核酸，標本的采集一般有兩大類，上呼吸道標本和下呼吸道標本。

上呼吸道標本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子(NPS)、鼻咽吸取物(NPA);下呼吸道標本主要包括痰液、氣管吸取物、支氣管肺泡灌洗液(BALF)等。

新型冠狀病毒的核酸檢測流程

對于新型冠狀病毒的核酸檢測，首先根據試劑盒說明書”樣本要求“部分進行樣本采集，常規的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。

獲得患者樣本后，需盡快進行檢測，如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求進行低溫封裝，并送到專門的檢測機構進行檢測。檢測機構收到樣本后，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批準產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批準產品說明書中指定的熒光定量PCR儀，通過熒光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。

上述過程中樣本的采集、保存、轉運，樣本核酸的提取和檢測、結果的判讀均須嚴格按照試劑盒說明書要求進行。

新型冠狀病毒核酸檢測原理

檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR(聚合酶鏈式反應)。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸(RNA)逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，包含一對特異性引物以及一個Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;如反應體系存在靶序列，PCR反應時探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發出熒光。每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環數(Ct值)與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高， Ct值越小。不同生產企業的產品會依據自身產品的性能確定本產品的陽性判斷值。